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　　以下是關(guān)于大鼠Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合指南：

　　BS-3097 大鼠Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測TLR4水平：用純化的大鼠TLR4抗體包被微孔板，依次加入樣本、HRP標(biāo)記抗體形成復(fù)合物，TMB顯色后通過450nm波長測定OD值，顏色深度與TLR4濃度呈正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成

　　核心組件?

　　預(yù)包被96孔酶標(biāo)板

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品(通常含2瓶，使用前需用稀釋液重構(gòu))

　　生物素化抗體、HRP標(biāo)記親和素

　　TMB顯色液及終止液

　　輔助溶液?

　　樣品稀釋液(20ml)

　　濃縮洗滌液(需20-30倍稀釋)

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：采集后靜置10-20分鐘，2000-3000rpm離心20分鐘取上清。

　　組織勻漿?：用預(yù)冷PBS勻漿后離心取上清。

　　保存?：2-8℃短期保存，-20℃長期保存，避免反復(fù)凍融。

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品配制?

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液重構(gòu)后，梯度稀釋為40ng/ml至0.625ng/ml系列濃度。

　　檢測流程?

　　加樣：每孔加入100μl樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育1-2小時。

　　洗滌：甩干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板3-5次。

　　顯色：加入TMB避光反應(yīng)15-30分鐘，終止后30分鐘內(nèi)讀板。

　　五、注意事項

　　質(zhì)量控制?：每次實驗需包含空白孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線孔。

　　干擾排除?：高濃度樣本需稀釋后復(fù)測，避免異嗜抗體干擾。

　　有效期?：未開封試劑盒2-8℃保存6個月，開封后按說明書要求使用。

　　六、適用范圍

　　僅限科研使用，檢測范圍通常為0.625-40ng/ml，靈敏度約0.156ng/ml。

　　(注：具體操作請以實際試劑盒說明書為準(zhǔn)，不同品牌可能存在細(xì)微差異。)

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